Identificación de genes pluripotenciales en el pez medaka

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Cultivos de células madres puede derivar directamente de embriones de desarrollo temprano e indirectamentea partir de células diferenciadas por la expresión forzada de factores de transcripción pluriponciales. Genes pluripotenciales se utilizan habitualmente para caracterizar cultivos de células madres de mamíferos a nivel molecular. Sin embrago, dichos genes se han desconocen en vertebrados inferiores. En este sentido, el pez medaka de laboratorio es especialmente adecuado porque tiene células madres embrionarias (ES) y datos de secuencia genómica. Por investigación de homología y expresión in vivo y en vitro se identificaron siete genes de pluripontecialidad en medaka. Mediante el análisis de RT-PCR, los siete genes se dividen en tres grupos de patrón de expresión. El grupo I incluye a nanog y oct4 que muestra expresión gonadal específica; el grupo II contiene sall4 y zfp281 mostrando expresión gonadal preferenciales; el grupo III tiene a klf4, ronina y tcf3 exhibiendo también expresión en varios tejidos somáticos, aparte de las gónadas. Las transcripciones de los siete genes son sumistrados maternalmente y persisten en un alto nivel durante la embriogénesis temprana. Se hizo uso de embriones en desarrollo temprano y gónadas de adultos para examinar la expresión en las células madres y derivados diferenciados por hibridación in situ. Sorprendentemente, nanog y oct4 son latamente expresados en blastómeros pluripontes de embriones de 16 células. En el testículo adulto, expresión de nanog fue específico a espermatogonia, las células madres germinales, donde tcf3 la expresión se produjo en células diferenciadas y espermatogonia. Lo más importante, todos, los siete genes son marcadores pluriponciales in vitro, ya que tienen alta expresión en células madre embrionarias no diferenciadas, pero dramáticamente baja regulación en la diferenciación. Por lo tanto, estos genes han conservado su expresión pluriponcial-específica in vitro desde mamíferos hasta vertebrados inferiores.

Localización de las diversos transcriptos del gen relaxina en el cerebro de las anguilas.

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Relaxina 3 (RLN3) es un miembro recién descubierto de la superfamilia de la insulina. Se aislaron tres cDNA como RLN3-desde el cerebro de la anguila japonesa (Anguilla japonica). Las secuencias de aminoácidos deducidas de los cDNA como RLN3 contiene la estructura de dos cadenas comunes a relaxina incluyendo un motivo RXXXRXXI / V en la cadena B. El análisis filogenético asigno a los dos prepropeptides dentro del grupo RNL3 de teleósteos/mamíferos, los cuales son un par de duplicados generados por la duplicación del genoma total de tercera ronda específica de teleósteos, y el otro dentro del grupo RLN de teleósteos. Por lo tanto, se les designo como rln3a, rln3b y rln anguila. Transcriptos de rln3a fueron abundantes en la región media-posterior del cerebro y detectada en bajos niveles en las branquias, cabeza de riñón y los riñones. Transcriptos de rln3b también se detectaron en la región media-posterior del cerebro, pero los niveles de expresión fueron inferiores a los de rln3a. Los bajos niveles de transcriptos de rnl se detectaron en todas las áreas del cerebro, la pituitaria, tracto digestivo y gónada. Análisis cuantitativo de PCR no detectó diferencias en la expresión de algún gen rln3 o rln entre las anguilas de agua dulce y aclimatados al agua de mar. La hibridación in situ mostraron que rln3a se expresó en neuronas del lemnisco lateral del mesencéfalo y del centrale griseum (GC) de la parte posterior del cerebro, mientras que pequeñas cantidades de transcriptos rln se encuentran en las neuronas del núcleo periventricular del tubérculo posterior del diencéfalo y la GC. Estos resultados sugieren que los péptidos múltiples como RLN3 puede jugar un papel regulador en el cerebro de los peces eurihalinos.