martes, 23 de noviembre de 2010

Molecular clonamiento, caracterización y análisis de expresión de los genes TLR9, MyD88 y TRAF6 en carpa común ( Cyprinus carpio


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Inducción de vías inmune innatas es crítica para la defensa temprana del huésped, pero es limitado el entendimiento de cómo los peces teleósteos reconocen moléculas patógenas y activan esas vías. En mamíferos, las células del sistema inmune innato detecta estructuras moleculares patogénicas usando patrones de receptores de reconocimiento (PRRs). Funciones de TLR9 como un PRR que reconoce motivos CpG en DNA bacteriano y viral y MyD88 y TRAF6 requiere moléculas adaptadora para la señal de transducción. Aquí se reporta el aislamiento de la longitud total del cDNA, caracterización estructura y análisis de expresión de mRNA en tejidos de los genes ortólogos TLR9, MyD88 y TRAF6 en la carpa común. El marco de lectura abierto predice una codificada proteína de 1,064 amino acidos. Se encontró que los genes MyD88 y TRAF6 están duplicados en la carpa común. Ensayos de PCR cuantitativo de tiempo Real de los genes TLR9, MyD88a y b, y TRAF6ay b trascriptos de la carpa común indican que la expresión de mRNA varia entre tejidos. Expresión diferencial de copias duplicadas fueron encontradas para MyD88 y TRAF6 en carpa común en el tejido de musculo blanco y rojo, sugiriendo que paralogos pueden haber evolucionado y alcanzado una nueva función.

sábado, 13 de noviembre de 2010

Caraterización molecular y patrón de expresión de tres genes de la zona pelucida en esturion chino (Acipenser sinensis)


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Esturión chino (Acipenser sinensis) es una especie en peligro de extinción y también un recurso importante para la industria de la acuicultura. cDNA de longitud completa de tres genes de la glicoproteína de la zona pelucida fueron clonados y secuenciados. Los nuevos genes fueron denominados AsZP3.1, AsZP3.2, and AsZP3.3. Presentaron 1,388 pares de base (bp), 1,288 y 1,290 bp en longitud respectivamente y que podría traducirse en proteínas con 440, 394, y 398 aminoácidos, respectivamente.

Análisis de RT-PCR indicaron que AsZP3.1 mostraron una amplia distribución tisular en los niveles de mRNA incluyendo el hígado, riñón, bazo, corazón, y el ovario, pero ARNm de AsZP3.2 AsZP3.3 se expresa exclusivamente en la gónada.
Los tres mRNAs de AsZP3 no se detectaron durante la embriogénesis y el desarrollo larval y, además, no se detectaron en las gónadas de 1 y 2 años de edad en los esturiones chinos. Los tres mRNAs de AsZP3 se detectaron en los testículos de los machos de 3 años de edad y en los ovarios, de 4 y 5 años de edad, los esturiones chinos de hembra.

miércoles, 3 de noviembre de 2010

Trucha arcoiris posee dos mRNA de hormona sensible a lipase que se expresan diferencialmente y son reguladas independientemente por el estado nutricio

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Peces teleósteos almacenan lípidos en varios tejidos como triacilglicerol (TG). Durante la demanda metabólica, TGs almacenados son hidrolizados por la hormona sensible a lipasa (HSL). En este estudio, fueron aislados dos distintos cDNA que codifican HSL, clonadas y secuenciadas desde tejido adiposo en trucha arcoíris. La longitud total de los cDNAs, designadas como HSL1 y HSL2, fue de 2562 y 2887 pares de base en longitud respectivamente y comparten un 82% de identidad nucleotídica.
Análisis filogenético sugiere que las dos HSLs derivan de genes parálogos que pueden haber surgido durante un evento de duplicación específica del genoma de teleósteos. PCR cuantitativa en tiempo real, reveló que el HSL1 y HSL2 son expresados diferencialmente, tanto en términos de distribución entre los tejidos, así como en términos de abundancia en los tejidos seleccionados juveniles de trucha.